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組成中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞主要是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,包括大膠質(zhì)細(xì)胞(星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞)和小鼠小膠質(zhì)BV2。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的主要免疫細(xì)胞,可呈遞抗原,分泌多種細(xì)胞因子,吞噬細(xì)胞病原體和壞死組織。它們被認(rèn)為是大腦中的單核巨噬細(xì)胞,由于小膠質(zhì)細(xì)胞在顱內(nèi)免疫反應(yīng)中的重要作用,小膠質(zhì)細(xì)胞的研究已成為一個(gè)熱點(diǎn)。
小鼠小膠質(zhì)BV2的體外培養(yǎng)是研究小膠質(zhì)細(xì)胞功能的重要途徑。在這里,我們將整理小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)。那么主要試劑是什么?
1、PBS:PBS粉末,向每個(gè)袋中加入ddH2O,使體積達(dá)到1000ml,將pH值調(diào)節(jié)至7.2,高壓滅菌并滅菌。
2、0.25%胰蛋白酶消化液:使用時(shí)濃度為0.25%,含有0.02%EDTA。準(zhǔn)備時(shí),將250mg胰蛋白酶和20mgEDTA溶解在100mLPBS溶液中,并在無(wú)菌手術(shù)臺(tái)上使用0.22um一次性溶液,通過(guò)過(guò)濾器過(guò)濾,取50ml等分試樣,并保存在4°C下。
3、接種物的制備:先用DMEM-F12進(jìn)行90%基礎(chǔ)培養(yǎng),然后再用10%胎牛血清,后用1%體積分?jǐn)?shù)的雙抗體原液(青霉素+鏈霉素)制成青霉素和鏈霉素元素分別為100U/mL和100U/mL,分別儲(chǔ)存在4℃的冰箱中。
4、抗生素:將青霉素(800,000U)和鏈霉素(1,000,000U)溶解在無(wú)菌手術(shù)臺(tái)中高壓滅菌的雙蒸餾水中。分別加入4ml無(wú)菌水/青霉素和5ml無(wú)菌水/鏈霉素,分別制成200,000u/ml等分試樣,在-20°C的冰箱中儲(chǔ)存,并在使用前在4°C融化。注意避免反復(fù)冷凍和解凍,并使培養(yǎng)基的終濃度為100u/ml。
5、0.01%L-聚賴氨酸溶液的制備:稱取10mgL-聚賴氨酸溶液,將其溶于100ml無(wú)菌去離子水中,過(guò)濾并用0.22μm正壓過(guò)濾器分裝,在-20℃下儲(chǔ)存。
6、0.4%錐蟲藍(lán)溶液的制備。