人胚腎細(xì)胞293T是一種廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、基因工程和病毒學(xué)等領(lǐng)域的細(xì)胞系。它來源于人類胚胎中的腎小管上皮細(xì)胞。

       人胚腎細(xì)胞293T細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)如下：

　　1、研究對象為活細(xì)胞

　　在實(shí)驗(yàn)中，可以根據(jù)需要保持細(xì)胞活力，并且可以長期監(jiān)測、檢測甚至定量評估一些活細(xì)胞的狀況，包括活細(xì)胞的形狀、結(jié)構(gòu)和生命活動(dòng)。

　　2、研究條件可以人為控制

　　pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)條件可根據(jù)實(shí)際需要人為控制。同時(shí)，可以應(yīng)用化學(xué)、物理和生物因素作為實(shí)驗(yàn)觀察的條件。這些因素也可以受到嚴(yán)格控制。

　　3、研究樣本能達(dá)到比較均一

　　經(jīng)過一定代數(shù)的細(xì)胞培養(yǎng)，得到的細(xì)胞系可以達(dá)到均一，屬于同一類型的細(xì)胞。如有必要，可采用克隆等方法對細(xì)胞進(jìn)行純化。

　　4、研究內(nèi)容易于觀察、檢測和記錄

　　使用了各種研究技術(shù)，如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共聚焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等儀器設(shè)備。
 

　　人胚腎細(xì)胞293T培養(yǎng)操作流程：

　　1、培養(yǎng)基的制備及培養(yǎng)凍存條件：

　　1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基（rpmi-1640：gibco，貨號(hào)21875-091），90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清為10%。

　　2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度70%～80%。

　　3）冷凍保存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)用，液氮保存。

　　2、細(xì)胞處理：

　　1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1ml細(xì)胞懸液的凍存管放入37℃水浴中（水面應(yīng)低于凍存管蓋），搖勻解凍，轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，加入4ml培養(yǎng)基提前準(zhǔn)備好，攪拌均勻。1000rpm離心4分鐘，棄上清，加入1ml培養(yǎng)基并吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中過夜培養(yǎng)。第二天，更換液體并檢查細(xì)胞密度。

　　2）人胚腎細(xì)胞293T細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%即可培養(yǎng)。